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垂榆是一种较流行的园林风景树,为实现快速垂榆繁育,笔者结合自己多年实际工作经验,总结出一种简单易行的方法,现介绍如下:
一、选取砧木。砧木选取华北地区广为栽培的白榆树种,要求生长健壮,干形良好,三至六年生的大苗。在春季发芽前,按照要求高度约2至2.5米截去树头,横截面直径以2至5厘米为佳。
二、嫁接。
1.接穗要选一年生壮枝,芽要饱满,嫁接前现采集的或经过冬藏的都可以。
2.嫁接选用枝接法,具体操作时可用劈接法或插皮接法,但以劈接为佳。接穗带2至3个芽,在基部用利刀削成2至2.5厘米长的平滑斜面,再用利刀将砧木轻轻劈开;嵌入接穗,形成层对齐,接穗斜面高出砧木截面0.2厘米。若用插皮接法,接穗下部斜面要削成一面为2至2.5厘米的长斜面,一面为0.5厘米长的短斜面,然后用刀挑开砧木皮层。骨对骨插入接穗,要求接穗斜面露白o.2厘米,以利于成活。接好后用塑料膜将接口及砧木横截面包严包紧,然后套上塑料袋。根据砧木粗细,每棵树可接1至4个接穗。
3.接后15天检查,成活者可将砧木萌芽全部抹去,不成活者抹去弱芽,保留三五个壮芽,待下次补接,成活苗一个月后解除包扎物,解除时一定选取阴天时或晴天的傍晚,否则易造成刚放出来的嫩芽不适应外面的干热气候而死亡。当接穗上的芽长至30厘米长后,就要开始有选择地绑支撑物,防止大风刮掉接穗。
三、管理。嫁接苗要加强肥水的供应,促使其早发芽,发壮芽,注意修剪,抹去砧木上发出的原白榆芽,调整树枝的伸展方向,使冠形端正,不出现偏头。
四、整形。垂榆一船都要求整理成伞状。嫁接成活当年,在同一水平面上从不同方向选留3至5个主枝,在新梢尚未木质化时,向外水平绑缚,新梢长到80至100厘米时进行掐心,促发新梢。冬季修剪,主枝基部粗2厘米以上者,可保留80厘米短截,2厘米以下者可保留60厘米短截。防止偏冠。第二年每一主枝上选留2至3个延长枝向外延伸生长,可从新梢弯处截去,促进新梢生长,而后同样进行修剪,扩大树冠,同时要及时剪除内膛的下垂及高出伞顶的枝条。经过三四年培养,垂榆便可以出圃了。
一般是在夏季高温期进行,重辫黄刺玫最好在6月下旬到7月中旬采集嫩枝条,运用快繁智能控制系统控制温度、湿度。基质使用易于通气保湿的材料,如河沙、锤石、珍珠岩等。为了提高离体材料的生根率,用植物生长调节剂处理切口。要把好快繁材料质量、基质消毒关,在离体材料生根期协调好温度、湿度,生根后掌握住移苗管理关键技术,规模生产的重瓣黄刺玫苗木成活率可达85%―90%。采用嫩枝快繁育苗技术可以快速培育出大量根系发达、成活率高的重瓣黄刺玫苗木:具体做法如下:
快繁智能系统的安装与使用,于光照充足处,建立苗床,并安装好系统,铺上珍珠岩或河沙基质,经消毒后待用。
材料的采集与处理:选取1―2年生幼树上的粗壮枝、半木质枝条;或树令较大,但生长较旺盛的母树基部当年生半木质化萌生条。去掉梢部较嫩部分、截成15厘米左右的带叶枝段。每个材料剪掉下部的复叶,只留上部2枚复叶,下剪口为马耳形。选用ABT生根粉、吲哚已酸、吲哚丁酸都可以有效地促进生根。处理浓度50―200PPm,浸泡材料基部48小时:
快繁与管理:把经过处理的材料按3x3厘米的株行距插入苗床中、深度3―5厘米。插完后立即开启智能系统,湿度保持在85%以上,气温控制在35度以下,还要防止离体材料霉烂,经常喷酒灭菌剂。持续高温天加盖蔗阳网,透光率在70%―80%,效果更佳。。生根后应适当喷施氮肥和磷肥,例如浓度为0.1%的尿素与磷酸二氢钾溶液,对根系生长很有利。待大部分的根系由白色变为棕红色时,这些根可以正常地发挥吸收水分和养分的作用了,即可移入大田、这个时间大约为繁后40天左右。
移苗及大田管理:重瓣黄刺玫是阳性树种,喜光、耐旱、抗性强。但是,对于生根不久的小苗,夏末秋初气温高,移入大田时管理跟不上,就会前功尽齐。重辫黄刺玫移苗管理技术要把握两个关键:第一移苗时根系不能大嫩,没有木质化,移苗会严重伤根、成活率大大降低,所以,把握移苗时机很重要。第二给予遮阴蔽护并适当喷水,当苗木适应一周到10天、可以去除蔗阴物,按常规管理。冬季上冻时给小苗打冻水。另外,视苗木情况培土保护,以防止冬春季枯干。
非洲菊(Gerberajamesonii),为菊科,扶郎花属多年生常绿草本植物,又称“扶郎花”,为世界著名切花。原产于南非,性喜温暖,适于温室栽培。环境条件适宜可终年开花[1]。传统以种子、分株和扦插繁殖,繁殖速度慢,无法为商业化生产提供大批量优质种苗。利用组织培养方法,可获得大量品质一致的植株,且其生产不受季节影响,可周年供应。
1 材料与方法
从非洲菊黑心品种中,选健壮开花植株,取未展开的、直径约1cm大小的花蕾,带花梗切下。用纱布蘸洗涤剂水溶液擦洗后,在流水下冲洗干净。在超净台上用75%酒精浸泡15s,取出,放入0.1%升汞溶液中消毒8~10min,再用无菌水冲洗5~7次,无菌滤纸吸干表面水份,剥去苞片和舌状花瓣,留下花托,切成4块,以MS为基本培养基,附加如下不同激素(浓度单位为mg/L):诱导培养基为MS+BA5~8+IAA0.1~0.5。增殖培养基1BA1+NAA0.5; 2BA1+NAA0.3; 3BA1+NAA0.1; 4BA0.8+NAA0.1; 5BA0.5+NAA0.1。生根培养基11/2MS+IBA0.1+NAA0.05; 21/2MS+IBA0.3+NAA0.05; 31/2MS+IBA0.5+NAA0.05; 41/2MS+IBA1.0+NAA0.05。琼脂含量为0.7%,糖浓度3%,生根培养基糖浓度减半。培养温度25±2℃,每天光照12~14h,光照度1500~2000lux。
2 结果与分析
2.1 愈伤组织的诱导
在诱导培养基上,接种一周后花托开始膨大,未拔干净的小花体积增大、伸长,继续培养,有愈伤组织产生。一个月后,愈伤组织生长并分化出小芽,进而形成丛芽。将未分化的愈伤组织切成小块,分别移到新鲜的培养基上,每30d转瓶1次。部分愈伤组织能继续生长并获得小芽,其余的则只见愈伤组织增殖或变褐死亡,继代几次后,愈伤组织有玻璃化现象产生。
2.2 芽的增殖
及时将带有芽的愈伤组织转瓶。切去愈伤组织,以单芽繁殖,增殖周期为25~30d。在5种增殖培养基中均能形成丛生芽,同时,芽基部形成少量愈伤组织。增殖结果:按处理号顺序,5种培养基平均每个芽的增殖芽数分别为9.5、9.9、13.5、10.9、10.1个。增殖培养基以MS+BA1.0+NAA0.1组合最好。说明当细胞分裂素(BA)/生长素(NAA)的比值大时,促进芽的增殖[2],连续继代,结果相同。
2.3 芽的生根
把高2~3cm的芽单芽切下,接种在生根培养基中,结果4种培养基的生根率都为100%(表1),同时芽继续生长、叶面积增大,平均苗高可达5cm以上。10~15d可搬出炼苗、移栽。
将炼苗后的瓶苗进行清洗。把生根好的小苗从瓶中取出,轻轻洗净根部的培养基,注意不要伤根。用800倍甲基托布津(或多菌灵)浸泡10min后捞出,以1∶1的泥炭土和珍珠岩为介质(介质要先洒水,保持一定水份)进行假植,第一次浇好透水,加盖薄膜保湿,遮阳网遮荫,注意通风,1周后开始喷杀菌剂,每隔3d喷1次。10d后,新根发出可去盖膜,适当增加光照,进行喷雾保湿,以基质不积水为准。15d后,可结合喷药每周施叶面肥1次。苗的成活率可达95%以上。
3 讨论
在试验中,用白砂糖替代蔗糖,苗的生长势仍很强,苗质不受影响,这在大批量生产中可大大降低成本。试验过程中,固定NAA0.1mg/L,用BA2mg/L(含BA2mg/L)以上的浓度进行增殖试验,发现组培苗的增殖系数呈下降趋势,且出现玻璃化现象,BA浓度愈高,增殖系数愈小,玻璃化愈严重。可见,超过一定量浓度的BA对苗的生长起抑制作用。从生根试验中可看出,在试验激素浓度范围内,都能达到较好的生根结果。可见,非洲菊组培苗的生根较容易,对激素浓度适宜范围较宽。通过本试验,筛选出非洲菊花托组织培养各阶段最适培养基,可
工厂化生产非洲菊种苗提供参考依据。
大叶黄杨四季常青,适应性强,极耐修剪,是良好的绿篱材料,易造型且抗污染,是北方城市绿化不可缺少的常绿树种之一。其育苗快繁技术尤为重要,快繁以扦插为主,进行嫩枝扦插,成活率达96%以上。
1.育苗设施及插床用砖、水泥砌成约高20厘米、宽1米的苗床,内铺18厘米厚的基质,基质下层为5~8厘米厚的粗砂,上层为细砂。在距床面50厘米高处架设水管,管上每隔1.5米安装离心或四体喷头一只,用于喷雾。扦插前,苗床用0.3%的高锰酸钾溶液消毒。
2.材料采集和处理在优良的大叶黄杨幼龄母株上剪取树冠中上部、无病虫害、生长健壮的一年生半木质化或完全木质化枝条。枝条采下后立即洒水以防失水萎蔫。插穗采集最好与修剪结合进行,随采随用将剪取的枝条截成长10~15厘米的穗段,每一插穗不少于2~3个芽,去掉基部叶片,保留上部1~2个叶片,插穗的上切口位于芽上0.5~1厘米处平剪,下切口位于节下或叶柄下0.5厘米处斜剪,剪口要平滑,无伤芽,无裂痕,皮部无损伤。插穗剪好后按粗细分级捆扎,及时处理或直接扦插。插穗基部可用ABT生根粉溶液速蘸5~10秒,促使愈合生根。
3.扦插及插床管理大叶黄杨一年四季都可以进行扦插。春、夏、秋三季扦插需要搭建小拱棚,夏季扦插还应在小拱棚之上搭建遮阴棚室。3月上旬扦插的,可在当年移栽。9月下旬~10月下旬扦插的,在第二年春土壤解冻后提早移栽。
插穗随剪随用,插前可在禁乙酸溶液中速蘸,也可直接扦插。扦插深度为插条的2/3,扦插密度为600~700株/平方米。扦插完用800~1000倍多菌灵溶液喷透基质消毒。苗床插满后要立即喷雾,睛天每天上午和下午分别喷雾两次,中午每隔半小时喷一次,每次5~10分钟,炎热夏季要视情况增加喷雾次数,以降低温度。插后一周,便可产生愈伤组织,20天左右,90%生出新根。发根后,要注意减少喷雾次数及时间,以防引起烂根;并要加喷0.2%~0.3%的尿素或复合肥料,进行根外追肥,以促使扦插苗健壮生长。
4.炼苗扦插15~20天后开始生根,至插穗形成较完整、丰满的根系后开始炼苗,逐日减少喷水次数,增加通风次数。10~15天后逐渐撤除塑料棚膜,再经10~15天逐渐撤除遮阴网,进行全光炼苗。幼苗继续留床培养20天以上,即可移苗定植。移栽时,要尽量保持根系完整,随栽随浇水,以保证移栽成活。用此法一年可扦插繁殖大叶黄杨苗3次,大大缩短了育苗周期,并提高了苗木质量。
另外,床面杂草丛生时要及时拔去。土壤过分板结时,可用小铲子轻轻在行间空隙处松土,但不易过深,以免插穗基部受伤,影响根系生长。
大岩桐属苦苣苔科球根花卉,株高12厘米至25厘米,全株密布绒毛叶对生,花顶生或腋生,花冠阔钟形,花多呈白、粉、红、紫等色。花朵大,花色浓艳多彩,花期长,是深受人们喜爱的温室盆栽花卉。可用来装饰窗台、几案、会议室等。
大岩桐传统繁殖方法为播种法、扦插法、分球法等。大岩桐种子极小,每克种子有2.5万粒至3万粒,寿命较短,仅两个月左右。播种繁殖对土壤条件要求高,操作精细,且易发生性状变异、品种退化现象;扦插法虽可保持原品种特性,但繁殖系数较低,不能适应大批量生产的需要;分球法形成的植株又多具有株形不整齐的缺点,生产上亦不常用。基于以上原因,我们从1998年开始尝试用组培法繁殖大岩桐,基本上找到了适合大岩桐诱导、分化和生根的培养基配方和培养条件。
材料与方法供试材料为候毛大岩桐。剪取成年植株的幼叶,用流水冲洗半小时,在超净工作台上进行消毒处理。首先将经过消毒处理的植株幼叶放入75%酒精中浸泡30秒钟,之后用0.1%的氯化汞溶液处理5分钟至8分钟,最后用无菌水冲洗4次备用。以M S为基本培养基,附加蔗糖30克/千克、琼脂6克/千克及不同种类和浓度的激素,在PH值为5.8、温度为18℃至20℃条件下进行诱导、分化、生根培养。
诱导和分化将消毒后的幼叶切成0.4平方厘米至0.5平方厘米的方形小块,接种到附加2毫克/千克的6-BA、0.2毫克/千克的N AA的M S培养基上(苄氨基嘌呤BA为一种利于长的细胞分裂素,荼乙酸N AA为一种促进生根的生长素)在25℃愈伤组织,40天后少数愈伤组织上可分化出幼芽。
继代培养将愈伤组织块上分化出的幼芽切下,转入继代培养基上,继代培养基附加1毫克/千克的6-BA、0.1毫克/千克的N AA,培养温度为25℃,每天在1000LX至2000LX光强下连续光照12小时。一周后幼芽发育,并在基部形成大量芽体,一般一个月可长满培养基面,一个月应转移一次。
生根培养将继代培养中苗高达2厘米,有3片至4片完整叶片的小植株,转移到生根培养基上,生根培养基为1/2M S,附加1毫克/千克的I-BA(IBA为一种生长素)。培养条件与继代培养一致,2周后有根长出,可炼苗移栽。
炼苗与移栽影响大岩桐的移栽成活率的关键是控制好温度和湿度,大岩桐要求生长在高温、潮湿及半阴环境,通风不宜过分,要保持较高的空气湿度。移栽前先闭瓶炼苗1周,洗净根上附着的培养基,栽入装有蛭石的营养钵中,蛭石用0.5%的K M nO4消毒。搭塑料小拱棚保湿,棚上架遮荫网,保持棚内温度20℃至25℃,两周后逐渐揭开塑料薄膜,一个月后可定植上盆,常规培养5月至6月即可开花。
大岩桐组培快繁技术,比传统的播种法、扦插法、分球法繁殖系数高,植株整齐一致,由于是无性繁殖,其性状没有明显的分离。能保持原品种特色和降低繁殖成本。但继代培养过程中发现,同样是在1毫克/千克的6-BA条件下,有部分试管苗发生玻璃化,失去分化能力,而低于1毫克/千克的6-BA,分化数量明显减少,6-BA的适宜浓度有待进一步探讨。
山茶花是我国十大传统名花之一,生长茂盛、四季常青,深受人们喜爱。它的繁殖方法有扦插、嫁接、组培和播种等方法,我们经过多年的反复比较试验,发现扦插繁殖技术路径相对简单、成本低廉、繁殖系数高,成苗率达到95%以上,适合于大规模生产中采用。现将其主要技术路径总结如下:
1 扦插时间 在长沙地区以5~6月,8月下旬~9月中旬较为适宜, 10月~11月亦可扦插,但以5~6月扦插效果较好,50天左右即可生根,10月~11月扦插要120~150天才能生根,给管理带来很大困难,且成苗率相对较低。
2 插穗准备 在采取枝条前的2~3天,应对枝条的母本植株进行消毒、杀菌,以防止采摘生病带菌的枝条。要选择组织健壮、发育良好、无病虫害、无枯枝黄叶、营养特别充足的当年生半木质化枝条作为插条。枝条过嫩或过老都不利于扦插生根,过嫩容易腐烂,过老又难以生根。采摘枝条最好在阴天或有露水的清晨进行,枝条采摘后要立即浸泡在清水中,放置阴凉处。
3 插床准备 在大棚中建立插床,大棚使用遮阳网遮荫,给每个插床配置塑料小棚,床宽1.2~1.5m,扦插基质为粗河砂1份、细河沙2份和生黄土2份,均匀混合后,铺在插床上,厚度为20~25cm。扦插前要用高锰酸钾消毒。
4 扦插方法 剪取带有2片功能叶的插穗,其功能叶最好剪除1/3~1/2,防止插穗体内水分散失过快。剪口要平滑,功能叶下带一个节,每根枝条宜剪取2~3个插穗。随即用含有500ppm的吲哚乙酸、0.3%的磷酸二氢钾的泥团涂蘸插穗基部,扦插时用小木棍打孔,孔深2cm左右,然后插入插穗,用手压实,株行距为3~5×10~12cm。
5 插后管理 扦插结束后,立即将插床喷透水,所有生产用水宜用酸调节ph6.0左右(山茶花喜酸性环境)。大棚使用遮阳网遮荫,防止阳光直射,在插床内用塑料薄膜搭置小棚,以保持床内空气湿度,保持插条叶面湿润,当叶面干燥时用微喷设施喷水,还要保持基质湿润而不渍水。大棚内要早晚通风换气,当发现叶面有白霉点时,表明湿度过大,要立即给小棚通风,否则就会烂根。务必注意插床内的环境卫生,每周用杀菌剂消毒一次。大棚内温度宜保持在25~30℃左右,湿度保持在75%以上,约50天就开始生根,生根后要适当控水,控制湿度,增加光照,可以早晚揭开塑料小棚的两端,约15~20天后,发根比较完全时即可揭开小棚,同时可以喷施一些专用叶面肥1~2次,以利于生根长叶。30天以后,发出嫩芽,根长至3~4cm,即可移栽。
百合是世界上著名的切花品种之一,靠常规的小鳞茎分株方法繁殖,繁殖系数较低,1株百合每年只能得到1~3个小鳞茎[1]。有些种类可用鳞片扦插繁殖,但往往容易腐烂。另外,百合长期靠营养繁殖,容易感染病毒病,而影响百合品质[2]。组织培养快速繁殖技术,能够迅速去除病毒和更新品种,具有较高的经济价值和开发潜力,因而得到广泛的应用。近年来,很多花卉研究者进行了百合的组织培养繁殖研究,所选的外植体有珠芽、幼茎段、叶片、鳞片等[3 6],主要侧重于不同外植体对百合成苗和脱毒效果的研究,而关于利用组培苗叶片基部进行快速繁殖和结鳞茎的研究,报道较少[7]。本试验以组培苗叶片基部为材料,对影响百合成苗和结鳞茎的两类主要激素进行了系统研究,省去了对外植体消毒处理的过程,减少了污染机率,为将来大规模生产百合小苗和鳞球茎在理论和实践上提供参考依据。
1 材料与方法
1.1 材料
采用的百合品种为麝香百合(Liliumlongi flornmThumb),英文名字为Easterlily。
1.2 方法
取百合鳞片经消毒后,接种于MS培养基上,诱导丛芽体,丛芽体继代扩增后,剥取丛芽叶片基部进行处理。
1.2.1 6 BA和NAA处理 以MS为基本培养基,设计系列浓度的6 BA和NAA处理组合,6 BA(mg/L)为:0,0 5,1 0,2 0;NAA(mg/L)为:0,0 1,0 2,0 4。共16个处理组合,代号分别为:D11、D12至D44。每个处理组合接种3瓶,每瓶接10个叶片基部,长度约为1cm。2个月后观察统计,生根率以长根植株占成苗植株的百分数进行统计;结鳞茎率以结鳞茎植株占成苗植株的百分数进行统计。
1.2.2 培养条件 百合适宜的培养温度为22~25℃,光照强度为1000~1500lx,每日光照10~16h,相对湿度约为70%。
2 结果与分析
不同浓度激素组合对叶片成苗和结鳞茎的处理效果见表1。
2 1 成苗率
成苗率是指所出的苗数占接种的叶基部总数的百分数。随着6 BA浓度的加大,成苗率呈降低趋势。从4个浓度的6 BA看,不加6 BA的处理(D11、D12、D13、D14)成苗率最高,平均值为76 25%,说明6 BA对成苗有抑制作用。而适量的NAA对成苗有一定的促进作用,在这16个处理中,以D12处理成苗率最高。
2 2 增殖系数
组培百合的基本目标之一是在短时间内大量繁殖小苗和球茎,所以提高增殖系数,可在短时间内获得更多的小苗或球茎。综合这16个处理,以D22和D43处理增殖系数最高,分别为:1 7和2 0;其次为D12、D24和D34,均为1 6。
2 3 结鳞茎率和鳞茎直径
结鳞茎率以不加6 BA的为最高,随6 BA浓度加大,结鳞茎率下降;鳞茎直径也有类似的结果。表明6 BA对结鳞茎率和鳞茎直径有抑制作用。
2 4 株高和生根率
株高随着6 BA浓度的加大而降低,从1 7cm降到0 6cm;生根率以不加6 BA的为最高,平均值为90 5%,加大6 BA浓度明显抑制百合生根。这说明NAA对株高和生根的促进作用,随着6 BA浓度加大被抵消一部分或完全被抑制。
2 5 小苗的栽培和处理
对于苗高3~4cm的已生根带有鳞茎的小苗,可打开瓶口炼苗3~5d,然后移入沙∶土(1∶1)的基质中,保持温度15~25℃,湿度70%以上,50%自然光照,可得到较高成活率。所用沙土最好是经过灭菌的,如果用未灭菌的沙土,小苗茎部容易受细菌和霉菌的侵染而腐烂,影响成活率;用高温灭菌的沙土混合物,小苗不容易得病,长势较未灭菌的健壮,且成活率较高。对处于芽苗阶段的小苗,可继代至MS+NAA0 03mg/L的培养基中,促进其生长;对没有生根的小苗可继代至1/2MS+活性炭5%的生根培养基中,进行生根培养,然后再进行移栽。
3 小结与讨论
综合以上试验结果得出:6 BA主要有提高增殖系数的作用,但抑制结鳞茎和减小鳞茎直径,同时抑制植株长高和生根,这与赵祥云[5]的研究结果相似。NAA有促进成苗、植株长高和生根的作用,但过多NAA会使气生根增多,不利于小苗生长。从成苗和结鳞茎率角度看,本试验最优组合为D12;从提高增殖系数角度看,以D43最好;如果把成苗和提高增值系数结合起来,则D22最优。所以适当地调整6 BA和NAA的浓度比,才能得到理想的结果。本试验对影响百合成苗和增殖的2种激素进行了初步研究,从中选出了利于成苗和增殖的最优组合。王爱勤[7]等认为糖的浓度对试管结鳞茎有影响,关于糖浓度及如何调控和增加其他一些激素使百合在试管内快速结鳞茎和增大鳞茎直径等技术,有待于进一步研究
非洲菊为多年生草本植物,传统的繁殖方法为播种或分株繁殖。但非洲菊种子寿命短、发芽率低,而且播种繁殖变异率很高,难以得到性状一致的种苗,因而不能用于规模生产;而分株繁殖则存在繁殖慢,易退化和传播病害,也不适于现代的大规模生产,因而目前国外一般都采用组织培养的方法来生产种苗。非洲菊的组培研究在国内已有报道,但均局限于对个别或少数品种的不同外殖体、不定芽诱导率及生长方面的研究,即局限于实验室阶段的研究。在本项目中,为配合非洲菊种质资源库的建立及在生产中迅速推广非洲菊的优良品种,尽快提高我国非洲菊切花的品质,我们不仅对多达45个非洲菊品种进行了组培快繁,做了研究、比较。同时,也对组培快繁过程中某些因素对以后大田生产、切花品质及产量的影响进行了探索。现将结果报告如下:
材料与方法
1.材料:试验材料为本所从国内外收集的所有非洲菊品种共计45个,取花梗长为1-3cm的花蕾,切取花托部位作为外殖体。
2.方法:将花梗在0.1%氯化汞溶液中消毒12分钟后取出, 用无菌水冲洗7-8次。切下花托部位并分切为3-5mm小块,放于诱导培养基上培养。置于光照1000lux,温度25±3℃下培养。
待诱导出的不定芽长至3-4片叶,叶长约3-4cm大小时切下,置于增殖培养基上,于光照1500-2000lux,温度25±3 ℃下进行增殖培养,周期为20-25天。
将丛芽切成单株芽苗,放于生根培养基上进行诱导生根,温度、光照条件与增殖阶段相同。经过一个月生根培养,将生根苗出瓶移栽到苗床并统计生根率。
试验结果
一、非洲菊不定芽的诱导:
结果表明,各品种之间产生不定芽的能力差异很大, 对四种培养基的反应也不同。其中"皇后""红粉佳人""胭脂""国王""金边红"在C培养基上不定芽诱导率最高;"红太阳""黑珍珠""蛋黄""红宝石""灿烂""紫薇"则在B培养基上诱导率最高;而"龙吐珠"则只在D培养基上才可诱导出不定芽。
二、非洲菊的增殖培养:
结果显示,各个品种之间在增殖的速度上存在显著差异。但在试验范围内,随BA浓度的提高,增殖速度相应提高。但在较高的BA浓度条件下芽苗会变细、变弱,且随BA浓度进一步提高,芽苗变得更加丛生、细弱。根据这种情况,生产中在努力提高芽苗增殖率的同时,还应保证分生芽苗的健壮。根据品种不同, 一般把增殖率控制在2.5 -5.0之间。
三、增殖培养中BA浓度对大田栽培的影响:
本项试验中,采用增殖速度中等的"红宝石"品种进行试验。结果表明,在BA浓度为0.5ppm以下时,除增殖率随BA 浓度增加而显著提高外,其余各项指标均无显著差异。而在BA浓度为1.0PPM及2.0PPM时,除增殖速度比BA浓度为0.25ppm时成倍增加外,试管苗还表现出细弱、矮化和脆化等现象,这些现象在BA2.0PPM时更加明显。同时生根率及移栽成活率也随BA浓度增加略有降低。这些在高浓度BA培养基上连续增殖15代以上的试管苗,移栽到大田后表现出旺盛的分孽力,叶短而多,同时切花产量明显降低,且花茎细而矮,花朵明显小于正常种苗。其中在BA2.0ppm的培养基中增殖的试管苗尤为突出。说明过高的BA浓度不仅会影响试管苗本身的质量,还会严重影响大田生产的切花的产量和品质。对生产中其它品种的观察也可得出同样结论。
四、增殖代数对繁殖速度及大田栽培的影响:
该项试验所用品种仍为"红宝石"。从所示结果可以看出,增殖速度随着增殖代数的增加有明显提高。增殖到第30代时繁殖速度分别比第20代和第10代时提高7%和20%。这种随增殖代数增加而产生的培养材料对植物激素的依赖性减小的"驯化"现象在其它植物的组培中也有发现。试验中,在增殖30代以内虽然增殖速度有较显著提高,但对试管苗的质量,如试管苗的健壮与否、生根率及以后的大田生产中切花的质量和产量均无显著影响。
五、生根及移栽结果:
非洲菊试管苗大部分品种均易诱导生根。经25-30 天的生根培养,所有试验品种只有"鸿运"生根率低于70-80%,尚有待提高,其余品种的生根率均可达到90%以上,且平均每苗生根都在2.5 条以上。
将生根苗洗净根部附着物,移入苗床。一周内保持遮光80%和适当的湿度。一周后,适当增加光照,且每周淋一次无机液肥。在这种条件下,一般成活率均可达到85%以上。
六、讨论:
1.各品种间由花托诱导出不定芽的能力差异很大,品种间对激素种类和激素浓度的需求也有很大差异。因此为了获得较高的不定芽诱导率,需要对激素的种类和水平作更广泛的试验。
2.由花托直接诱导出芽,同时将增殖培养基中激素水平和增殖速度控制在适当的水平,在增殖30代以内,非洲菊试管苗的总变异率均未超过2%。此外, 在保持相对低浓度的细胞分裂素水平的情况下,增殖30代以内的试管苗,移栽到大田后表现良好,没有明显的退化现象。表明该技术既可达到快速繁殖的目的,又可保证种苗的质量,可满足现代化大规模生产的需要。但更高代数的试管苗的相应表现还有待进一步观察。
3.组培快繁过程中植物激素特别是细胞分裂素浓度对以后大田生产的影响很大,当激素浓度过高时,会导致分孽太多,降低切花的产量和质量。因此,在组培快繁过程中,应避免细胞分裂素浓度过高。
4.通过对非洲菊组织培养技术的研究,不但将我所所有45个品种都建立了组培快繁体系, 随时为社会提供大批量的优质种苗,创造一定的经济效益;还可配合种质资源库的建立及良种繁育,把引进及自育最新优良品种及时、快速地推广到生产中去有利于迅速提高我国非洲菊切花品质。而组培快繁过程中的某些因素对以后大田生产的切花品质及产量的影响的研究结果,对完善非洲菊的试管苗生产技术,保证试管苗质量,促进非洲菊的规模化、产业化生产具有重要意义。
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