组织培养已成为当前农林种苗生产中的一种重要的繁殖手段,与常规的无性繁殖方法相比,它具有繁殖速度快、周年生产、产品一致性好等优点,尤其在繁殖一些种源稀缺的品种时,更能体现它的优势。红叶石楠是近年从国外引进的一个国际新品种,组织培养可以分以下几个步骤进行:外植体的取得→初代培养(无菌系的建立)→继代培养(增殖培养)→生根培养→炼苗及过渡移栽→移植到大田。
外植体的取得
选择红叶石楠的茎尖和茎段作为组培用的外植体。在取得红叶石楠母株后,先置于温室内培养2周左右,期间注意不洒叶面水,每隔3-5天喷施一次杀菌剂,可有效降低初代培养时的污染率。在实际操作中,选取嫩枝先端未木质化和半木质化部分,剪成长10cm左右的单芽,茎段部分去叶留2mm左右叶柄,茎尖部分可保留半张小叶,以饱和洗衣粉溶液浸泡3分钟,用清水冲洗后备用。
初代培养
清洗后的外植体在接种前需进行消毒处理,在超净工作台上用75%酒精浸泡10秒钟,再转入0.15%升汞溶液中灭菌8分钟,倒去灭菌液,用事先准备好的无菌水冲洗4-5次,沥干水后,即可将带腋芽的茎段或茎尖以生态学下端朝下,垂直接种到初代培养基上,以每瓶培养基接种一个外植体为宜。经过多次试验,初代培养基以1/2MS+蔗糖30g+琼脂7g+2.0BA+0.2IBA为最佳,pH值5.5-5.8,培养室温度控制在25℃-30℃之间,光照12小时。接种后一周左右腋芽开始萌动,30-40天可伸长到2cm左右,即可切下进入下一阶段的继代(增殖)培养。
继代培养(增殖培养)
一般第一次继代时增殖率较低,经2-3次继代后增殖数可达5倍左右。继代培养基可用MS+1.0BA+0.1IBA,pH值5.5-5.8之间,每日光照12小时。无根的试管苗经30-40天培养达到3cm左右时,即可切割以扩大繁殖。当继代苗达到一定数量后,可以进行生根培养。
生根培养
当红叶石楠无根苗长到高2cm左右时,可转移到生根培养基上培养。生根培养基可用1/2MS+0.2-0.3NAA,一般经一周左右可见红色根生成,30-40天后根长1-3cm,即可进行炼苗反驯化,准备移栽。
炼苗及过渡移栽
红叶石楠组培苗移栽可省略瓶内炼苗过程,如能在温室中拧松瓶盖放置3-5天炼苗则更好,但要注意温度应控制在20℃-30℃之间。过渡移栽是整个组培过程中最为关键的一步,如失败,则前功尽弃。因此移栽前要准备充分,如能在早春和秋冬季移栽在温床上效果最佳。在实际操作中,应根据不同地区的气候特点而有所区别。在江浙一带,过渡苗床可建在普通单体塑料大棚内,床宽1.2m左右,床四周用砖砌高30cm,床底整平,有条件的可加铺地热加温线,上铺15-25cm的移栽基质,基质以蛭石∶珍珠岩∶泥炭=1∶1∶1为好。
组培苗是在无菌条件下繁育的,在移栽过程中对外界环境需要一个渐进的适应过程,因此需要对过渡苗床进行较为严格的消毒处理。实践中我们使用1000倍敌克松溶液浇透整个苗床基质,再用0.15%高锰酸钾溶液喷洒苗床表面及四周,24小时后即可移栽小苗。也可用800倍福尔马林喷洒苗床表面,用塑料薄膜密封24小时以上,再通风12小时,即可使用。
幼苗从瓶内取出后,用清水将根部的琼脂等洗净,同时应注意尽量减少根部损伤。种入苗床后,浇灌时尽可能选择清洁的水源,移栽当天喷施1/4-1/2MS营养液,并喷施800-1000倍甲基托布津或1000倍多菌灵药液,以后每隔一周喷施一次,需连续喷施3-4次,移栽初期需特别注意保持苗床和空气湿度,一般需全封闭管理一周左右,再半封闭一周左右,根据天气情况在25天左右可逐步通风,除去覆盖物。在春秋季节移栽时,需遮荫三周左右,冬季遮荫二周左右即可。同时应注意控制苗床温度在15℃-30℃之间才利于成活,如环境温度超过35℃,则不宜移栽。一般过渡移栽50天后,小苗就可上盆移栽,春季就可移入大田。
大田移栽
大田移栽的时机应根据小苗生长情况和天气情况确定。一般小苗长至5cm以上移栽就可以保证95%以上成活率,如在10cm以上移栽则效果更好。大田移栽后期管理与其他方法繁殖的小苗一样操作即可。
红蕉(Red and Green)是汕头市引进的优稀香蕉新品种,属于香蕉属中的AAA群体(红绿香蕉品种)。该品种具有生势壮旺、抗病力强、适应性广等特点,植株高大,假茎高300-350cm,叶片大而厚,叶柄长,生育期长。红蕉组培苗,从移植至开花结果需14个月左右,移植后18个月左右才能成熟。每穗果5-6梳,每梳16个果左右,果指粗短,一般栽培单株产量20-40kg。该产品以其特有的暗紫红色果皮、细腻的肉质以及特殊香味而深受消费者的欢迎。
1 材料的准备
在无传统病害的红蕉种植区,选用生势强健、挂果整齐、产量高的母株,挖取其刚露出地面的吸芽作为诱导材料。
2 吸芽的诱导
剥除吸芽外面的叶鞘,用水冲洗干净。在无菌条件下用75%酒精溶液消毒30秒钟,再用浓度为0.1%的HgCl2消毒21分钟,然后再用无菌水冲洗7-8次,切取其茎尖,将茎尖分成4份,放在MS+BA3-6mg/L+3%糖+琼脂7.5g/L的诱导培养基中,置于黑暗的光照培养箱中,保持温度28-30℃,培养40-50天即可出芽。
3 丛芽的继代增殖
用MS+BA3-6mg/L+NAA0.2mg/L+3%糖+琼脂7.5g/L的培养基进行继代增殖,在28-30℃、1500lx光照环境中培养20-25天即可继代增殖1次,并获得2.0-2.7倍的增殖率。在培养过程中应有充分的光照,每天1500lx光照时间应不少于8小时,如果没有光照或光照不足,则其假茎和叶柄的颜色退淡、转绿甚至变为白色,影响增殖率。继代培养一般不超过12代。
4 生根培养
经一段时间的继代增殖,当芽长到具有3-4片叶、高约3cm时可转入MS+IBA1mg/L+AC0.1mg/L+3%糖+琼脂7.5g/L的生根培养基中,在28-30℃、3000lx光照条件下培养25-30天即可出瓶假植。
5 瓶苗的假植
假植苗采用拱形薄膜大棚栽培。大棚四周覆盖40目防虫网,里层为薄膜,外层为遮阳网,门口应设有缓冲间。基质采用塘泥:火烧土:河沙为1:1:1的混合土。种植前应先将基质淋透,在营养袋中挖1个小洞,将苗根平顺地放入,然后回添干净的河沙,压实,浇足定根水。
假植苗对水分的要求比较严格,前期要求比较高的空气湿度,种植后7天内尽可能保持95%的相对湿度。为保证早发根,提早恢复生长,也可采用内设薄膜小拱棚的形式保持湿度,之后采用干湿交替控制基质水分。在高温、干燥的中午应开门通风,喷水降温、增湿。假值苗生长后期要适当控制水分。由于假值苗生长前期对肥料的要求不高,故采用薄施或叶面追肥如喷施0.2%磷酸二氢钾等就能满足其对肥料的需求。同时应定期喷施防病、杀虫药剂,如每隔10-15天喷施1次氧化乐果和井冈霉素1000倍混合液,假植苗一般可获得95%以上的成活率。小苗长至5-7片新叶、假茎高20cm左右即可出圃定植。出圃前掀开薄膜和遮阳网炼苗3-5天,将更有得于大田种植成活。
(1)扦插:通常在春季进行,剪取长8〜10厘米的粗壮枝条作插穗,插后保持插床湿润和18〜20°C的温度,约30天可生根。梅雨季、8月下旬也可扦插,插后注意做好遮荫(遮去阳光50%〜60%)和喷水工作,20天左右可生根。春插者秋季开花,秋插者第2年开花。
(2)分株:春季萌芽前结合翻盆进行。将满盆大株自根茎结合的薄弱处分割成数小丛,然后分别栽植。
(3)播种:4〜5月行盆播,发芽适宜温度为20〜25°C,播后覆盖塑料薄膜保湿,约半个月可发芽。
(4)压条:春天进行。将枝条压埋于另一花盆的土中,经3个月左右可生出新根,根多时剪离母株栽植。
【夜香树栽养要点】(1)温度:喜温暖,生长最适宜温度为15〜30°C。不耐寒,越冬温度应不低于5°C。因低温而嫩梢与叶片枯死射,只要茎干和根系新鲜正常,可在第2年春天剪去受害部分,能重新萌芽抽枝、生长开花。夏季当在气温达到32°C以上时,最好能遮去中午前后2〜3小时的强烈阳光,并加强叶面喷水。
(2)光照:喜阳光充足的环境,耐半阴。虽在半阴条件下也能生长与开花,但不及阳光充足时旺盛。只是在盛夏时需适当遮去中午的阳光。长期置半阴处的植株,不能突然移至光照强烈处,否则枝叶会受到严重灼伤。应先移至稍阳处过渡一段时间,再搬至强烈阳光下。
(3)浇水:生长期间的浇水要掌握“不干不浇,浇则浇透”的原则,保持盆土湿润。梅雨季要防止积水。夏季对水分要求较多,应增加浇水量,不使盆土过于干旱,似免影响植株的生长与开花。冬季则应节制浇水,保持盆土较为干燥的状态。
(4)环境湿度:夏季天晴而干燥时,应经常向叶面喷水。
(5)施肥:因生长迅速,且从春末至秋开花不断,消耗养分多,所以在生长期需要不断追施肥料。春季萌芽后应追施2〜3次以氮为主的肥料,以促进枝叶生长;5月下旬后每半月追施1次氮磷钾结合的肥料,以促使枝叶的生长与开花。9月后停施氮肥,仅施磷钾肥。冬季停止施肥。
(6)修剪:耐修剪。春季结合翻盆对植株进行修剪,剪去细弱枝、过密枝、枯枝,并把留下的1年生枝条进行短截,以促发分枝,形成繁密的树冠,开出更多的花朵。花后应删除过密的枝条,剪去残败的花序,并短截徒长枝,促使新枝萌生和开花。
(7)翻盆:每年春天翻盆1次。喜肥沃、疏松的微酸性砂质壤土,基质可用腐叶土、园土、河砂等材料配制。
(8)病虫害防治:有煤污病、轮纹病和介壳虫、粉虱等病虫危害。
【栽养常见问题】常见问题产生原因病部褪绿,叶片逐渐黄化脱落落叶①低温,阴冷时更易发生;②过阴;⑤盆土过干或湿涝
红花继木的组织培养包括初代培养、继代增殖培养和生根培养。组培技术在红花继木生产上的应用,不仅仅限于组培育苗,还有望通过组培在育种上的应用,解决种间、属间等远缘杂交和杂种胚停止发育的缺陷,使红花继木的种质资源进一步纯化和提高。
1、外植体
选生长健壮、无病虫害的红花继木茎尖、芽及枝等作外植体,其中外植体采集在7~8月最好,污染率较低。
2、培养基
红花继木的组织培养包括初代培养、继代增殖培养和生根培养。试验表明,初代培养和继代增殖培养基可参考MS+BA1.0mg/l+IBA1.0mg/l;生根培养基可参考1/2MS+NAA1.0~1.5mg/l+0.1%的活性炭。
3、培养条件
红花继木的培养条件一般为:温度20℃左右,光照时间14h/d(每天14小时),光照强度为1500LX(勒克斯)。
夜来香,别名夜兰香、夜香花,夜来香属灌木。小枝披短柔毛,分枝柔弱,叶对生,卵状长圆形或宽卵形,全缘,基部心形凹陷,叶具短茸毛,有长柄,质薄,先端有小尖。花簇生,有短柄,生于叶腋,黄绿色,芳香,尤其在夜间。花萼5裂,花冠具短筒,花期5月至9月,果狭圆状锥形,渐尖,长7厘米至8厘米。该花木原产亚洲热带,我国南方各省区有栽培。喜温暖湿润和阳光充足的环境,喜肥沃的土壤,忌积水。适宜栽于庭院内和盆栽,其花既可欣赏,又香味扑鼻,还可供食用和药用。
盆栽方法
1.配制盆土:夜来香喜疏松、排水良好、富有机质的偏酸性土壤。其盆土一般用泥炭土或腐叶土3份加粗河泥2份和少量的农家肥配成,盆栽时底部约1/5深填充颗状的碎砖块,以利盆排水,上部用配好的盆土栽培。
2.适宜环境:盆栽夜来香要求通风良好的环境条件,5月初至9月底宜放院内阳光充足或阳台上养护,其虽然喜阳光充足,但在夏季的中午应避免烈日暴晒。
3.施肥:在其生长过程中,应每隔10天至15天施一次液肥,4月下旬开始每半月施一次稀薄液肥,从5月中旬起即可保证不断开花,如能施用春泉883或惠满丰等高效腐殖酸液肥,则效果更好。
4.调水:其夏季是生长旺季,除施足肥料外盆土必须保持经常湿润,必要时一天浇2次水。若是幼苗,每天应向叶面喷水1次至2次。
5.适温:每年10月中下旬应将其移入棚室内,棚室温度要求保持8℃至12℃,如温度低于5℃,叶片会枯黄脱落直至死亡。
6.换盆:换盆宜在春季4月初出室前进行,换盆时应去掉部分旧土和老根,换上新的培养土,并进行重剪,以促发新枝。换盆后要保持盆土湿润,但盆内不能有积水,换盆后若发现嫩叶略有下垂,要及时浇水。
7.调整株形:栽培管理中需搭设棚架,植株上棚后要及时打顶,促使多分枝,花开后要及时剪去残花梗,并加施肥料,花谢后应将枯干枝叶和过密枝条剪去。
8.治虫:其常有蚜虫和介壳虫危害,可用天王星、氯氰菊酯和快杀灵等防治,效果较好
大岩桐属苦苣苔科球根花卉,株高12厘米至25厘米,全株密布绒毛叶对生,花顶生或腋生,花冠阔钟形,花多呈白、粉、红、紫等色。花朵大,花色浓艳多彩,花期长,是深受人们喜爱的温室盆栽花卉。可用来装饰窗台、几案、会议室等。
大岩桐传统繁殖方法为播种法、扦插法、分球法等。大岩桐种子极小,每克种子有2.5万粒至3万粒,寿命较短,仅两个月左右。播种繁殖对土壤条件要求高,操作精细,且易发生性状变异、品种退化现象;扦插法虽可保持原品种特性,但繁殖系数较低,不能适应大批量生产的需要;分球法形成的植株又多具有株形不整齐的缺点,生产上亦不常用。基于以上原因,我们从1998年开始尝试用组培法繁殖大岩桐,基本上找到了适合大岩桐诱导、分化和生根的培养基配方和培养条件。
材料与方法供试材料为候毛大岩桐。剪取成年植株的幼叶,用流水冲洗半小时,在超净工作台上进行消毒处理。首先将经过消毒处理的植株幼叶放入75%酒精中浸泡30秒钟,之后用0.1%的氯化汞溶液处理5分钟至8分钟,最后用无菌水冲洗4次备用。以M S为基本培养基,附加蔗糖30克/千克、琼脂6克/千克及不同种类和浓度的激素,在PH值为5.8、温度为18℃至20℃条件下进行诱导、分化、生根培养。
诱导和分化将消毒后的幼叶切成0.4平方厘米至0.5平方厘米的方形小块,接种到附加2毫克/千克的6-BA、0.2毫克/千克的N AA的M S培养基上(苄氨基嘌呤BA为一种利于长的细胞分裂素,荼乙酸N AA为一种促进生根的生长素)在25℃愈伤组织,40天后少数愈伤组织上可分化出幼芽。
继代培养将愈伤组织块上分化出的幼芽切下,转入继代培养基上,继代培养基附加1毫克/千克的6-BA、0.1毫克/千克的N AA,培养温度为25℃,每天在1000LX至2000LX光强下连续光照12小时。一周后幼芽发育,并在基部形成大量芽体,一般一个月可长满培养基面,一个月应转移一次。
生根培养将继代培养中苗高达2厘米,有3片至4片完整叶片的小植株,转移到生根培养基上,生根培养基为1/2M S,附加1毫克/千克的I-BA(IBA为一种生长素)。培养条件与继代培养一致,2周后有根长出,可炼苗移栽。
炼苗与移栽影响大岩桐的移栽成活率的关键是控制好温度和湿度,大岩桐要求生长在高温、潮湿及半阴环境,通风不宜过分,要保持较高的空气湿度。移栽前先闭瓶炼苗1周,洗净根上附着的培养基,栽入装有蛭石的营养钵中,蛭石用0.5%的K M nO4消毒。搭塑料小拱棚保湿,棚上架遮荫网,保持棚内温度20℃至25℃,两周后逐渐揭开塑料薄膜,一个月后可定植上盆,常规培养5月至6月即可开花。
大岩桐组培快繁技术,比传统的播种法、扦插法、分球法繁殖系数高,植株整齐一致,由于是无性繁殖,其性状没有明显的分离。能保持原品种特色和降低繁殖成本。但继代培养过程中发现,同样是在1毫克/千克的6-BA条件下,有部分试管苗发生玻璃化,失去分化能力,而低于1毫克/千克的6-BA,分化数量明显减少,6-BA的适宜浓度有待进一步探讨。
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